Klenov fragment
Klenov fragment je veliki proteinski fragment koji se formira kada se DNK polimeraza I iz E. coli enzimatski preseče posredstvom proteaze subtilisina. Prvobitno je opisan 1970.[1] On zadržava 5'-3' polimeraznu aktivnosti i 3’ → 5’ egzonukleaznu aktivnost za odvajanje prekodirajućih nukleotida i korekturu, ali gubi svoju 5' → 3' eksonukleaznu aktivnost.
Drugi manji fragment formiran kad se DNK polimeraza I iz E. coli preseče subtilisinom zadržava 5'-3' eksonukleaznu aktivnost, ali nema druga dva dejstva koje manifestuje Klenov fragment (i.e. 5'-> 3' polimerazna aktivnost i 3'->5' eksonukleazna aktivnost).
Istraživanja
5' → 3' egzonukleazno dejstvo DNK polimeraze I iz E. coli nije podesno za mnoge oblike primene, te stoga Klenov fragment, koji ne ispoljava tu aktivnost, može da bude veoma koristan u istraživanjima. Klenov fragment je ekstremno koristan u istraživačkim procesima kao što su:
- Sinteza dvolančane DNK iz jednolačanog obrasca
- Popunjavanje pobučenog 3' kraja DNK fragmenata da bi se dobili tupi 5' krajevi
- Uklanjanje isturenih 3' prepusta
- Priprema radioaktivnih DNK segmenata
Klenov fragment je isto tako bio originalni enzim koji se koristio za znatnu amplifikaciju segmenata DNK u procesu polimerazne lančane reakcije (PCR),[2] pre nego što je bio zamenjen termostablnim enzimima kao što je Taq polimeraza.[3]
Reference
- ^ Klenow H and Henningsen I (1970). „Selective Elimination of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited Proteolysis”. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 65 (1): 168—175. PMC 286206 . PMID 4905667. doi:10.1073/pnas.65.1.168.
- ^ Saiki RK; et al. (1985). „Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia”. Science. 230: 1350—54. PMID 2999980. doi:10.1126/science.2999980. CS1 одржавање: Експлицитна употреба et al. (веза)
- ^ Saiki; et al. (1988). „Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase”. Science. 239: 487—91. PMID 2448875. doi:10.1126/science.2448875. CS1 одржавање: Експлицитна употреба et al. (веза)
Spoljašnje veze
- Klenow+Fragment на US National Library of Medicine Medical Subject Headings (MeSH)
- Diagram at vivo.colostate.edu
- p
- r
- u
i inicijacija
Prokariotska (inicijacija) | |
---|---|
Eukariotska (priprema u G1 fazi) | Prereplikacioni kompleks: Kompleks prepoznavanja mesta početka (ORC1, ORC2, ORC3, ORC4, ORC5, ORC6) · Održavanje minihromozoma (MCM2 · MCM3 · MCM4 · MCM5 · MCM6 · MCM7) · CDC6 Autonomna replikaciona sekvenca Protein jednolančanog vezivanja (SSBP1, SSBP2, SSBP3, SSBP4) Primaza: PRIM1 · PRIM2 |
Oba | Početak replikacije/Ori/Replikon Replikaciona viljuška (zaostajući i vodeći lanci) · Okazakijev fragment · Prajmer |
Prokariotska (elongacija) | DNK polimeraza III holoenzim (dnaC, dnaE, dnaH, dnaN, dnaQ, dnaT, dnaX, holA, holB, holC, holD, holE) · Replizom · DNK ligaza · DNK stega · Topoizomeraza (DNK giraza) Prokariotska DNK polimeraza: DNK polimeraza I (Klenov fragment) |
---|---|
Eukariotska (sinteza u S fazi) | |
Oba | Kretanje: Procesivnost · DNK ligaza |