Barvení (biologie)
Barvení je biochemická metoda, kterou se přidá k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a slouží v biologii na prokázání výskytu (kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci) specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v pletivu, nebo k obarvení celých struktur a objektů, které zlepšuje nebo umožňuje jejich pozorování optickým mikroskopem.
Užívaná barviva
abecedně:
- bismarckova hněď
- karmín – barví jádra červeně, extrakt ze samiček červce nopálového (Coccus cacti), nepřebarvuje, dříve využíván v embryologických studiích pro barvení celých bloků tkání.
- Coomassie
- DAPI
- eosin
- Erie garnet = direct red 10
- etidium bromid
- fenolová červeň
- hematoxylin
- Hoechstovo barvivo
- jód
- jádrová červeň „Kerlechtrot“ – barví jádra červeně, v roztoku síranu hlinitého
- Kongo červeň = Congo red = direct red 28 – barví amyloid červeně
- krystalová violeť
- kyselina pikrová (2,4,6-trinitrofenol) – barví cytoplazmu buněk a svaly žlutě
- kyselý fuchsin – kolagenní vlákna červeně
- Luciferová žluť – fluorescenční barvivo
- malachitová zeleň
- methylová zeleň
- methylová modř
- neutrální červeň
- nilská modř
- nilská červeň = Nile blue oxazone – barví tukové kapénky červeně
- olejová červeň = oil red O – barví tuk červeně
- rhodamin
- safranin
- saturnová červeň (sirius red F3B, direct red 80, F3B 200, C. I. No. 35780, CAS No. 2610-10-8) – azobarvivo, kolagenní vlákna barví červeně, případně barvení amyloidu
- irius red 4B = direct red 79 = L4B 200 – azobarvivo
- šafrán – barví kolagen, extrakt z blizen šafránu setého
- Weigertův železitý hematoxylin = Weigert's Iron Hematoxylin – barví chromatin v jádrech šedě nebo temně hnědě (modročerně až hnědočerně)
Barvicí metody
Existuje mnoho detailně rozpracovaných barvících metod, z nejvýznamnějších je možné uvést:
Barvení mukopolysacharidů
Mukopolysacharidy se barví směsí PAS, alciánové modři a hematoxylinu, a to tímto postupem:
- odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilce
- kyselina jodistá 0,5 % 5 minut
- praní vodou 2–3 min, oplach destilovanou vodou
- Schiffovo reagens 20–30 min
- tekoucí voda 10 min., oplach destilovanou vodou
- alciánová modř (před použitím se doporučuje přefiltrovat) 1-2 hod.
- oplach vodou
- hematoxylin 5 min.
- praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3 (5 min.), xylen 4 (5 min.), montování
Výsledek:
- neutrální mukopolysacharidy a glykogen – červeně
- kyselé mukopolysacharidy – modrozeleně
- jádra – modře hematoxylinem
Barvení kolagenních vláken
Kolagenní vlákna je možné barvit za použití saturnové červeni a Weigertova železitého hematoxylinu:
- odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.)
- důkladně proprat ve vodě
- Weigertův železitý hematoxylin (roztok A + roztok B 1 : 1) 5 min. nebo gallocyanin 24 hod.
- praní v tekoucí vodě 5–10 min.
- saturnová červeň 1–20 min. (10 ml 1 % roztoku saturnové červeně + 90 ml nasyceného roztoku kys. pikrové)
- několikrát oplach v absolutním alkoholu, xylen 3, xylen 4, montování
Výsledek:
- kolagenní vlákna – červeně
- svalovina – žlutě (pouze pokud je v saturnové červeni také kyselina pikrová)
- jádra – hematoxylinem
Barvení elastických vláken
(orcein + hematoxylin)
- odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilované vodě
- orcein 6-8 hod. při teplotě 38-40 °C
- oplach destilovanou vodou
- oplach kyselým alkoholem 70 %
- praní ve vodě
- hematoxylin 5 min.
- praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3, xylen 4, montování
Výsledek:
- elastická vlákna – červenohnědě (elastické vazivo (žluté vazy obratlů, vazy hrtanu), elastická chrupavka (ušní boltec, epiglottis))
Giemsovo barvení
Tato část článku je příliš stručná nebo postrádá důležité informace. Pomozte Wikipedii tím, že ji vhodně rozšíříte. |
Gramovo barvení
Základní barvící metoda v mikrobiologii. Barvíme fixovaný preparát.
- krystalová violeť na 20s – oplach ve vodě
- Lugolův roztok na 20s – oplach ve vodě
- aceton – odbarvení (dokud odtéká barva z preparátu)
- Karbolfuchsin na 20s – oplach ve vodě.
Externí odkazy
- Obrázky, zvuky či videa k tématu barvení na Wikimedia Commons
Metody:
- Metody histologického studia (PDF dokument)
- Odběr materiálu pro histologické vyšetření Archivováno 30. 5. 2020 na Wayback Machine. (textový dokument DOC)
Barviva:
- přehled barviv (anglicky)
Tento článek je příliš stručný nebo postrádá důležité informace. Pomozte Wikipedii tím, že jej vhodně rozšíříte. Nevkládejte však bez oprávnění cizí texty. |